cDNA克隆技術(shù)實(shí)驗(yàn)原理

基因調(diào)取和基因合成均是體外獲取目標(biāo)基因的方法。

基因調(diào)取：從細(xì)胞或組織中提取總DNA或總RNA后擴(kuò)增出目的基因；該方法獲得的基因是天然存在的，但由于個(gè)體差異，調(diào)取到的基因可能存在SNP，即調(diào)取到的序列與NCBI等數(shù)據(jù)庫(kù)登錄序列不完全一致。另外，當(dāng)樣本中目的基因含量較低時(shí)，可能調(diào)取不成功。

全基因合成：通過(guò)化學(xué)合成的方法獲得目的DNA序列。該方法簡(jiǎn)單，快速，并且可以保證合成后的序列與您要求的序列完全一致，但當(dāng)片段太長(zhǎng)時(shí)，合成費(fèi)用也相對(duì)較高。

cDNA克隆實(shí)驗(yàn)流程

1. 引物設(shè)計(jì)與合成

2. RNA提取和反轉(zhuǎn)錄

3. 以cDNA為模板，采用設(shè)計(jì)好的引物進(jìn)行PCR，回收目的片段

4. 連接載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌細(xì)胞，進(jìn)行菌落PCR驗(yàn)證、酶切驗(yàn)證和測(cè)序

5. 測(cè)序結(jié)果分析和出具報(bào)告

基因調(diào)取/合成cDNA克隆服務(wù)信息

項(xiàng)目名稱(chēng)

客戶(hù)提供

結(jié)果交付

實(shí)驗(yàn)周期

價(jià)格

基因調(diào)取、合成

目標(biāo)基因序列
其他實(shí)驗(yàn)要求

1、基因載體質(zhì)粒約3ug
2、基因載體甘油菌1ml
3、原始測(cè)序文件和拼接文件

4、實(shí)驗(yàn)報(bào)告（全基因合成無(wú)報(bào)告）

2-4周

點(diǎn)擊詢(xún)價(jià)

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基因調(diào)取/合成檢測(cè)服務(wù)—客戶(hù)文章

Fu X.Q. et al: Activation of STAT3 is a key event in TLR4 signaling-mediated melanoma progression. Cell Death Dis. 2020, IF= 8.469.

【研究?jī)?nèi)容】：本研究利用基因表達(dá)/敲除、細(xì)胞功能檢測(cè)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，雙熒光素酶分析等實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)人黑色素瘤中TLR4的表達(dá)與STAT3的激活/磷酸化呈正相關(guān)，TLR4配體通過(guò)MYD88和TRIF激活黑色素瘤細(xì)胞中的STAT3，促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)。當(dāng)抑制黑色素瘤中STAT3的功能時(shí)，TLR4激活產(chǎn)生的效應(yīng)減弱，說(shuō)明STAT3激活對(duì)TLR4信號(hào)介導(dǎo)的黑色素瘤發(fā)展至關(guān)重要，為黑色素瘤的病理生理學(xué)提供了新的線索。

使用技術(shù)：基因調(diào)取、載體構(gòu)建

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Cai X.D. et al: LncRNA ILF3-AS1 mediated the occurrence of epilepsy through suppressing hippocampal miR-212 expression. Aging-US. 2020, IF=5.682.

【研究?jī)?nèi)容】：本研究通過(guò)基因過(guò)表達(dá)、雙熒光素酶等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)LncRNA ILF3-AS1在顳葉癲癇（TLE）患者的海馬和血清中水平升高，ILF3-AS1通過(guò)靶向miR-212誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子和MMP3、MMP9的表達(dá)。值得注意的是，針對(duì)ILF3-AS1/miR212/MMP3/9軸的治療策略可能是治療TLE的有效方法。

使用技術(shù)：載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)、基因調(diào)取服務(wù)、cDNA克隆服務(wù)

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Rui Y.J. et al: Disruption of MDA5 mediated innate immune responses by the 3C proteins of Coxsackievirus A16, Coxsackievirus A6, and Enterovirus D68. J Virol. 2017, IF= 5.103.

【研究?jī)?nèi)容】：柯薩基病毒A16 (CV-A16)和A16 (CV-A6)，以及腸病毒D68 (EV-D68) 是手足口?。℉FMD）和26種小兒呼吸道疾病的主要病因。作者通過(guò)基因表達(dá)、雙熒光素酶和免疫共沉淀（Co-IP）等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，這三種病毒的3Cpro蛋白可以與宿主的線粒體抗病毒信號(hào)蛋白競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合MDA5，從而抑制MDA5下游的RLR信號(hào)通路中關(guān)鍵因子I型干擾素（IFN）的產(chǎn)生；此外，它還能降解NF-κB信號(hào)通路中的關(guān)鍵因子TAK1而導(dǎo)致NF-κB失活。本研究揭示了這三種病毒破壞宿主先天免疫應(yīng)答的新機(jī)制。

使用技術(shù)：基因調(diào)取及表達(dá)實(shí)驗(yàn)外包、載體構(gòu)建技術(shù)

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