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最近，中國研究人員演示的功效三種基于信使核糖核酸(mRNA)技術(shù)的猴痘病毒(MPXV)疫苗在小鼠模型中對抗致死性痘苗病毒(VACV)攻擊。

背景

MPXV屬于痘病毒科，也有天花病毒和VACV。在20世紀(jì)80年代，傳染性痘苗病毒的活病毒制劑在全球根除了天花。雖然復(fù)制減毒，活病毒疫苗，像所有批準(zhǔn)的MPXV疫苗一樣，表達(dá)許多病毒蛋白，因此引起了安全問題。

細(xì)胞外包膜病毒(EEV)和細(xì)胞內(nèi)成熟病毒(IMV)是MPXV的兩種感染形式；然而，在小動物模型中，使用這些疫苗的亞單位疫苗顯示出比活病毒疫苗更好的安全性。例如，研究人員表明，用表達(dá)A27L一種截短的IMV表面蛋白)的大腸桿菌接種，保護(hù)小鼠免受VACV的致命攻擊。因此，需要探索更多的MPXV抗原和組合策略以獲得更好的抗MPXV疫苗。

此外，自2022年7月世界衛(wèi)生組織(世衛(wèi)組織)宣布MPXV為突發(fā)公共衛(wèi)生事件以來，需要更多更高效的MPXV疫苗。mRNA疫苗技術(shù)顯示出對抗嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2型(新型冠狀病毒)的前景，基于mRNA技術(shù)的所有疫苗都顯示出高效性和安全性。

關(guān)于研究

受抗新型冠狀病毒mRNA疫苗成功的啟發(fā)，本研究中的研究人員開發(fā)了三種抗MPXV的mRNA疫苗，VGPox1、VGPox2和VGPox3。這些疫苗表達(dá)MPXV EEV蛋白A35R和IMV蛋白M1R，分別是VACV中A33R和L1R的同系物。VGPox 1和2是編碼由A35R EEV和全長M1R組成的融合蛋白的單一mRNA分子，而VGPox 3是分別編碼A35R和M1R的mRNA-脂質(zhì)納米顆粒(LNP)復(fù)合物的混合物。VGPox 1和2之間的唯一區(qū)別是后者缺少A35R莖區(qū)。

研究人員測試了這三種疫苗的體液和細(xì)胞抗VACV免疫以及它們對小鼠致命病毒感染的保護(hù)作用。研究小組給每只小鼠鼻內(nèi)注射1×10-6的疫苗6接種疫苗36天后的空斑形成單位(PFU) VACV-WR病毒。

他們每天測量體重并監(jiān)測他們的癥狀，直到處死。他們在病毒攻擊后的第9天或體重減輕超過15%時處死動物。他們采集動物的肺，在組織勻漿器中磨碎，然后進(jìn)行三次冷凍-融化，從細(xì)胞中釋放病毒。然后，他們向VeroE6細(xì)胞中加入不同稀釋度的上清液進(jìn)行噬菌斑分析。

研究結(jié)果

研究結(jié)果顯示，所有三種mRNA疫苗引發(fā)了相似水平的抗A35R抗體，但只有VGPox 1-和2引發(fā)了更高水平的抗M1R抗體。因此，僅來自VGPox 1和2的接種血清可以在早期時間點(diǎn)中和活病毒。不出所料，VGPox 3疫苗在2005年無效在試管內(nèi)中和試驗(yàn)。有趣的是，在所有時間點(diǎn)，VGPox 2顯示出比VGPox 1和VGPox 3更高水平的針對M1R的總免疫球蛋白G (IgG)。此外，VGPox1的蛋白表達(dá)水平低于VGPox 2。t細(xì)胞.然而，研究人員無法確定蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異如何影響兩種疫苗誘導(dǎo)的IgG水平。

結(jié)論

編碼融合形式A35R和M1R (VGPox 1和VGPox 2)的mRNA疫苗在所有時間點(diǎn)都有效地誘導(dǎo)了細(xì)胞培養(yǎng)物中高水平的A35R和M1R IgGs，并中和了活病毒。然而，這兩種mRNAs的混合物(VGPox 3)不能在很久以后獲得與VGPox 3誘導(dǎo)的M1R特異性抗體相同的結(jié)果。然而，研究中測試的所有三種mRNA疫苗在病毒攻擊試驗(yàn)中均提供了100%的保護(hù)?；蛟S，當(dāng)所有試驗(yàn)動物在第36天用活病毒(抗A35R和抗M1R)攻擊時中和抗體都被三種疫苗引發(fā)了。

抗EEV病毒和IMV病毒的中和抗體可能提供對抗活病毒攻擊的保護(hù)。因此，盡管后期誘導(dǎo)了抗M1R抗體，但仍然不確定VGPox3如何在致命病毒攻擊期間保護(hù)小鼠?？傊?，考慮到痘苗病毒和MPXV的高度同源性，VGPox 1和2都可能是針對MPXV的有效mRNA疫苗，因?yàn)樗鼈冊谥滤佬远幻绮《竟羝陂g完全保護(hù)小鼠。

蛋白組/代謝組實(shí)驗(yàn)

? iTRAQ 定量蛋白質(zhì)組學(xué)

? Label Free 實(shí)驗(yàn)檢測服務(wù)

? LC-MS/MS 蛋白質(zhì)譜鑒定

? DIA 全息掃描定量蛋白質(zhì)
? 廣泛靶向代謝組學(xué)

蛋白/核酸相互作用實(shí)驗(yàn)

? GST pull down

? RNA pull down

? DNA pull down

? Co-IP 免疫共沉淀

? TAP-MS串聯(lián)親和純化

分子細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

? 基因調(diào)取/合成 (cDNA克隆)

? 熒光定量PCR (qPCR)

? 載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)服務(wù)

? miRNA靶基因驗(yàn)證
? 慢病毒包裝

科研產(chǎn)品

? 哺乳動物細(xì)胞表達(dá)載體

? 人cDNA克隆庫

? 慢病毒表達(dá)載體

? 慢病毒干擾載體

抗體工程服務(wù)

? 單克隆抗體測序

? 抗體從頭測序

? 抗體表達(dá)服務(wù)

? 重組抗體表達(dá)

實(shí)驗(yàn)試劑盒

? RNA pull down 試劑盒

? GST pull down 試劑盒

? COIP 試劑盒

? Flag 試劑盒