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Pull down實(shí)驗(yàn)提速50%的秘訣:4類蛋白標(biāo)簽選擇指南!

蛋白標(biāo)簽是指利用DNA重組技術(shù),在目標(biāo)蛋白質(zhì)的N端或C端附加上的特定氨基酸序列(短肽或蛋白)。它不僅能輔助目標(biāo)蛋白的表達(dá)、純化和定位檢測(cè),更能作為“關(guān)鍵工具”助力互作蛋白的捕獲與驗(yàn)證,是開展Pull-downCo-IP等互作實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。

表位標(biāo)簽、親和標(biāo)簽和熒光標(biāo)簽是三類最常用的蛋白標(biāo)簽。其中,親和標(biāo)簽常用于蛋白pull-down實(shí)驗(yàn)—通過親和層析技術(shù),將帶標(biāo)簽的“誘餌蛋白”固定在能與標(biāo)簽特異性結(jié)合的親和介質(zhì)上,再與含潛在“獵物蛋白”的樣品(如細(xì)胞裂解液)孵育,通過洗脫和檢測(cè)(Western-blot質(zhì)譜),確定與誘餌蛋白結(jié)合的“獵物蛋白”。

還在被互作實(shí)驗(yàn)用的各種蛋白標(biāo)簽搞得頭大?它們?cè)诨プ鲗?shí)驗(yàn)里到底有啥用、有什么區(qū)別?今天一次性捋清楚,讓你看完不再懵圈。

輝駿生物在本文主要給大家介紹pull-down實(shí)驗(yàn)中最常見的4種親和標(biāo)簽,分別為:His、GST、Strep、MBP。

1 His標(biāo)簽

His標(biāo)簽通常由6-10個(gè)連續(xù)組氨酸組成,His標(biāo)簽?zāi)芘c二價(jià)金屬離子(如Ni2?或Co2?)形成配位鍵,從而與螯合的樹脂特異性結(jié)合,達(dá)到蛋白親和純化的目的。

通過咪唑來洗脫,蛋白純度一般,標(biāo)簽也幾乎沒有促溶性,但是適用于原核、酵母、哺乳動(dòng)物、昆蟲各類表達(dá)系統(tǒng),并且成本非常低。

適用實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景:標(biāo)簽小,干擾少,最通用,適合大多數(shù)可溶性蛋白。


2 GST標(biāo)簽

GST標(biāo)簽來源于血吸蟲的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶,分子量約26 kDa,利用GST與谷胱甘肽(一種含巰基的三肽,GSH)的高親和性進(jìn)行蛋白純化。

通過還原型谷胱甘肽進(jìn)行洗脫,蛋白純度較高,但有一定的促溶性,適合難溶蛋白,它通常用于原核或酵母系統(tǒng),并且成本相對(duì)高一些。

適用實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景:適合研究蛋白-蛋白相互作用(GST pull-down);GST標(biāo)簽可增強(qiáng)部分蛋白可溶性,助力難溶誘餌蛋白的實(shí)驗(yàn)。


3 Strep-tag II標(biāo)簽

Strep-tag II標(biāo)簽由8個(gè)氨基酸WSHPQFEK)組成的小標(biāo)簽,與Strep-Tactin蛋白高度特異結(jié)合。

通過生物素進(jìn)行溫和洗脫,單次純化的蛋白純度能達(dá)到90%以上,適用原核、酵母、哺乳動(dòng)物昆蟲各類表達(dá)系統(tǒng),但成本很高。

適用實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景:洗脫最溫和,不影響蛋白活性,適合后續(xù)需保持蛋白功能的實(shí)驗(yàn)。


4 MBP標(biāo)簽

MBP標(biāo)簽是一種來源于大腸桿菌的天然蛋白,396個(gè)氨基酸殘基,分子量約為40 kDa。標(biāo)簽結(jié)構(gòu)中包含一個(gè)穩(wěn)定的β-折疊和α-螺旋結(jié)構(gòu)域,形成一個(gè)深槽,可與麥芽糖或直鏈淀粉結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的標(biāo)記和分離。

通過麥芽糖進(jìn)行洗脫,蛋白純度高,也有很強(qiáng)的促溶性,尤其對(duì)于在原核表達(dá)系統(tǒng)中易形成包涵體的蛋白,MBP標(biāo)簽往往能提高其可溶表達(dá)比例,因而在特定情況下具有較強(qiáng)的實(shí)用價(jià)值。

適用實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景:適合難溶性誘餌蛋白(MBP能顯著提升蛋白溶解度);但標(biāo)簽較大,需謹(jǐn)慎選擇。

輝駿生物4種親和標(biāo)簽對(duì)比,分別為:His、GST、Strep、MBP,專業(yè)提供各類型標(biāo)簽蛋白試劑盒.png

總體來說:

His 標(biāo)簽——“性價(jià)比之王”,適合多數(shù)常規(guī)場(chǎng)景,如常見的His pull down;

GST標(biāo)簽——“提高可溶性,最適合蛋白相互作用分析,GST pull down;

Strep-Tag II 標(biāo)簽——“高純度、敏感蛋白首選”,適合嚴(yán)苛實(shí)驗(yàn)需求;

MBP標(biāo)簽——“難溶蛋白的救星”。


pull-down實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品試劑盒


 實(shí)驗(yàn)類型
 產(chǎn)品名稱
 貨號(hào)
 RNA pull down
 F2-RNA pull-down試劑盒
 FI8701
 生物素RNA pull-down試劑盒
 FI8702
 CircRNA pull-down試劑盒
 FI8710
 DNA pull down
 DNA pull-down試劑盒
 FI8901
 蛋白 pull down
 GST pull-down試劑盒
 FI8804
 His pull-down試劑盒
 FI8805
 藥物 pull down
 生物素藥物pull-down試劑盒
 FI8601


如果你在蛋白標(biāo)簽的選擇、表達(dá)策略或純化流程上還有疑問,歡迎咨詢我們:4006991663。

輝駿生物提供各種類型蛋白互作試劑盒以及互作實(shí)驗(yàn)服務(wù)RIP、RNA pull down、ChIP、DNA pull down、IP實(shí)驗(yàn)),可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求定進(jìn)行選擇,助力您的科研更高效、更精準(zhǔn)!

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