抗體的工業(yè)制備需要努力生產(chǎn)穩(wěn)定的細(xì)胞系和商業(yè)上可行數(shù)量的純抗體。  這些抗體隨后被用于診斷、分子微生物學(xué)，甚至用于治療某些疾病。

體外方法

在體外方法中，使用雜交瘤方法產(chǎn)生抗體，其中雜交瘤細(xì)胞是通過融合骨髓瘤細(xì)胞和 B 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的。 這些淋巴細(xì)胞可能來自小鼠或大鼠。 將靶抗原注射給動(dòng)物，從而使動(dòng)物針對(duì)該抗原進(jìn)行免疫。 在動(dòng)物產(chǎn)生抗體后，提取淋巴細(xì)胞并與骨髓細(xì)胞融合以產(chǎn)生雜交瘤。 該雜交瘤細(xì)胞系隨后 在體外 。 它們將抗體分泌到培養(yǎng)基中，從中分離和收集它們。

檢查污染后，將雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)物在滾瓶或攪拌的細(xì)胞懸浮培養(yǎng)物中擴(kuò)增，使其生長至細(xì)胞密度為 1-2 X105 個(gè)細(xì)胞/mL。 將它們進(jìn)一步培養(yǎng)數(shù)周并進(jìn)行監(jiān)測以檢查它們的生長情況。 然后將雜交瘤細(xì)胞以 3000-4000rpm 的速度離心 15 分鐘以將它們與培養(yǎng)基分離。 收集抗體，然后送去進(jìn)一步純化。 體外 方法可以產(chǎn)生 15–50mg/L 的抗體產(chǎn)量。

體外方法優(yōu)缺點(diǎn) 

體外靈活性，范圍從毫克到克。 它具有 > 95% 純度的抗體，帶有痕量的 IgG 污染，并且具有成本效益。 然而，隨著抗體產(chǎn)量的增加， 體外 生產(chǎn)的成本可能會(huì)上升。 基于細(xì)胞系， 體外 生產(chǎn)成本可能比 體內(nèi) 方法高 0.5 至 6 倍。

體內(nèi)方法

初始步驟體內(nèi)類似于體外方法，其中將抗原注射到動(dòng)物體內(nèi)，例如小鼠或大鼠。 動(dòng)物產(chǎn)生抗體后，提取淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤。 中使用的懸浮培養(yǎng)相比，在小鼠或大鼠中擴(kuò)增克隆的雜交瘤細(xì)胞 體外 方法 將大約 1X 106 個(gè)雜交瘤細(xì)胞注入每只小鼠的腹腔。 這些雜交瘤細(xì)胞在小鼠中作為腹水腫瘤擴(kuò)增 7-10 天，然后收獲腹水。 其他細(xì)胞和脂質(zhì)成分通過離心分離以收集抗體。

體內(nèi)方法優(yōu)缺點(diǎn)

使用動(dòng)物 體內(nèi) 方法導(dǎo)致以簡單的方式產(chǎn)生大量抗體。 它還可用于擴(kuò)增在體外條件下表現(xiàn)不佳的雜交瘤。 然而，這種方法需要足夠的動(dòng)物設(shè)施，并且污染率可能很高。 此外，這種方法對(duì)動(dòng)物來說是痛苦的，這可能會(huì)引發(fā)生物倫理問題。

中空纖維生物反應(yīng)器

在中空纖維生物反應(yīng)器中，雜交瘤細(xì)胞在隔間中生長，可以連續(xù)添加新鮮培養(yǎng)基以減少有毒副產(chǎn)物的積累。  這種方法可以產(chǎn)生高濃度的抗體。

抗體純化

任何一種方法產(chǎn)生的抗體在使用前都必須經(jīng)過純化。  此步驟包括離心、過濾和其他分離方法。  在離心過程中，整個(gè)細(xì)胞和細(xì)胞碎片可能會(huì)從溶液中分離出來。

隨后，它可以通過離子交換色譜柱，在那里可以通過與特定配體結(jié)合來分離抗體。  抗體在低離子濃度下沉淀，此原理也可用于分離抗體。  為了根據(jù)抗體的大小分離抗體，可以使用電泳。

抗體表達(dá)服務(wù)內(nèi)容-輝駿生物

抗體表達(dá)實(shí)驗(yàn)服務(wù)流程

抗體表達(dá)服務(wù)客戶案例-輝駿生物

喜歡此內(nèi)容的人還喜歡

Fitgene News

抗體表達(dá)服務(wù)

抗體從頭測序

為什么蛋白質(zhì)測序有用？