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標(biāo)題：Inhibition of long noncoding RNA Linc-Pint by hepatitis C virus in infected hepatocytes enhances lipogenesis.

期刊：Hepatology

影響因子：14.971

關(guān)鍵詞：HCV，lncRNA，Linc-Pint，PRC2，SRPK2，F(xiàn)ASN，脂肪生成

主要技術(shù)方法：RNA pull down，質(zhì)譜鑒定（LC-MS/MS），RNA免疫共沉淀（RIP）等

 丙型肝炎病毒(HCV)經(jīng)是引起丙型肝炎的病原體，屬于RNA病毒。HCV編碼的幾個(gè)因子可以損害宿主基因，實(shí)現(xiàn)慢性感染，通常導(dǎo)致肝硬化或肝細(xì)胞癌(HCC)。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(LncRNA)在生物調(diào)節(jié)中顯示出不同的作用，而其在HCV病毒復(fù)制和相關(guān)疾病中的作用還知之甚少。

2020年11月，美國(guó)圣路易斯大學(xué)病理系的Mousumi Khatun等人發(fā)現(xiàn)在HCV感染的肝細(xì)胞和肝臟樣本中，Linc-Pint顯著下調(diào)。從機(jī)制上講，Linc-Pint可以結(jié)合并下調(diào)絲氨酸/精氨酸蛋白特異性激酶2 (SRPK2)的蛋白水平，進(jìn)而抑制脂肪生成相關(guān)基因（FASN和ACLY）的表達(dá)。HCV介導(dǎo)的Linc-Pint下調(diào)增強(qiáng)了脂肪生成，有利于病毒復(fù)制和肝病的發(fā)展。

1.    Linc-Pint在HCV感染的肝細(xì)胞中下調(diào)且促進(jìn)細(xì)胞增殖
qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，Linc-Pint在HCV感染的肝細(xì)胞或是慢性HCV感染的人肝活檢標(biāo)本中含量較低。當(dāng)在肝細(xì)胞中過表達(dá)Linc-Pint后，細(xì)胞增殖受到顯著抑制。

2.    Linc-Pint結(jié)合SPRK2蛋白并下調(diào)其表達(dá)
據(jù)報(bào)道，Linc-Pint由p53轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)，通過與PRC2相互作用，抑制癌細(xì)胞的遷移和侵襲。研究者利用RNA pull-down和質(zhì)譜檢測(cè)（LC-MS/MS）技術(shù)，發(fā)現(xiàn)在許多腫瘤中高表達(dá)且對(duì)腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移有重要作用的SRPK2可能是Linc-Pint的潛在結(jié)合蛋白，并利用RNA pull down WB和RNA免疫共沉淀（RIP-qPCR）技術(shù)驗(yàn)證了兩者之間的相互作用。RNA pull-down實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步確定了Linc-Pint與SRPK2的結(jié)合位點(diǎn)位于其635-904nt之間。

接下來，作者研究了Linc-Pint對(duì)SPRK2的影響。當(dāng)在細(xì)胞中過表達(dá)Linc-Pint時(shí)， SPRK2蛋白水平下調(diào)，而RNA水平?jīng)]有變化，因此接著探討了Linc-Pint是否影響SPRK2蛋白的穩(wěn)定性。Linc-Pint過表達(dá)的細(xì)胞中使用MG132蛋白酶體抑制劑處理后，Linc-Pint對(duì)SPRK2蛋白的抑制減弱了，表明Linc-Pint可能通過蛋白酶體的降解在蛋白水平下調(diào)SRPK2的表達(dá)。

3.    Linc-Pint通過下調(diào)SRPK2來抑制脂肪合成途徑
據(jù)報(bào)道，SRPK2通過磷酸化SR蛋白（富含絲氨酸/精氨酸的蛋白），誘導(dǎo)脂肪合成途徑的不同基因如脂肪酸合成酶(FASN)、ATP檸檬酸裂解酶(ACLY)的有效剪接，導(dǎo)致這些基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá)增加。qRT-PCR結(jié)果顯示，Linc-Pint過表達(dá)顯著下調(diào)了肝細(xì)胞中FASN和ACLY的mRNA水平。熒光顯微鏡觀察進(jìn)一步顯示，Linc-Pint通過抑制SRPK2抑制脂肪合成基因的表達(dá)。干擾SRPK2基因后，肝細(xì)胞中FASN和ACLY mRNA的表達(dá)顯著下調(diào)，表明SRPK2參與了肝細(xì)胞脂肪合成途徑的調(diào)控。

4.    Linc-Pint在HCV感染的肝細(xì)胞中的作用
已有報(bào)道指出HCV感染誘導(dǎo)了肝細(xì)胞中的脂肪從頭合成途徑，因此我們猜測(cè)Linc-Pint是否通過抑制肝細(xì)胞脂肪合成途徑來抑制HCV復(fù)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HCV感染后促進(jìn)了SRPK2和FASN的表達(dá)，而當(dāng)同時(shí)過表達(dá)Linc-Pint時(shí)，SRPK2和FASN的表達(dá)被顯著抑制。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)表明，Linc-Pint的過表達(dá)抑制了SRPK2激酶的活性。那么Linc-Pint過表達(dá)是否影響HCV的復(fù)制呢？qPCR結(jié)果表明Linc-Pint過表達(dá)抑制了HCV的復(fù)制；干擾SRPK2后，HCV的復(fù)制受到抑制。

本研究有助于從機(jī)制上理解Linc-Pint在HCV相關(guān)的肝臟發(fā)病機(jī)制中的作用。