對(duì)單個(gè)細(xì)胞外囊泡進(jìn)行突變蛋白分析可檢測(cè)胰腺癌

發(fā)布時(shí)間：2022-04-26 16:13:56作者：輝駿生物-fitgene

腫瘤細(xì)胞衍生的細(xì)胞外囊泡(EV)正在作為循環(huán)生物標(biāo)志物進(jìn)行探索，但尚不清楚批量測(cè)量是否可以進(jìn)行早期癌癥檢測(cè)。來自哈佛醫(yī)學(xué)院的Ralph Weissleder教授團(tuán)隊(duì)在Science Advances雜志發(fā)表文章，研究發(fā)現(xiàn)單EV分析(sEVA)技術(shù)可提高癌癥診斷的準(zhǔn)確性。

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胰腺導(dǎo)管腺癌（PDAC）目前是癌癥死亡的重要原因之一。治愈胰腺癌的唯一方法是在它仍然在局部時(shí)通過手術(shù)切除它。在目前的治療模式下，只有20%的患者可手術(shù)，而40%的患者會(huì)出現(xiàn)局部但手術(shù)無法切除，而其余的40%的患者會(huì)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。盡管有最先進(jìn)的計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)、磁共振成像(MRI)和超聲內(nèi)鏡對(duì)“影像學(xué)發(fā)現(xiàn)的局部疾病”和接受手術(shù)的患者進(jìn)行手術(shù)，但切緣的病理陽性率為40%至70%，并且胰周淋巴結(jié)病變病理陽性率為60%～80%。如果我們要治愈更多的胰腺癌患者，就需要新的診斷工具來識(shí)別患有臨床前和真正局部疾病的患者，并探索新的治療方法以允許更多的R0/N0切除。

高分辨率、對(duì)比增強(qiáng)CT和MRI成像是常做的檢查，但它們?cè)跈z測(cè)微小疾病方面的敏感性通常受到限制，特別是在新輔助和術(shù)后環(huán)境中。技術(shù)進(jìn)步繼續(xù)快速提高檢測(cè)血液樣本中循環(huán)生物標(biāo)志物的能力。這些“液體活檢”標(biāo)志物包括突變或甲基化無細(xì)胞DNA(cfDNA)、腫瘤相關(guān)細(xì)胞外囊泡(EV)、循環(huán)腫瘤細(xì)胞和代謝參數(shù)（例如，糖尿病和肌肉萎縮）。盡管EV、cfDNA和代謝標(biāo)志物已經(jīng)顯示出用于PDAC診斷的前景，但它們目前的檢測(cè)靈敏度需要進(jìn)一步改進(jìn)才能在臨床上有用。特別是在疾病早期，較低的診斷準(zhǔn)確性可能是由于PDAC的大量基質(zhì)成分、與無腫瘤胰腺炎無法區(qū)分的胰腺炎局灶區(qū)域共存以及早期循環(huán)生物標(biāo)志物數(shù)量少。

研究人員已經(jīng)開發(fā)了許多分析EV的方法。許多早期技術(shù)依賴于批量測(cè)量，單次測(cè)量需要102到106個(gè)EV。雖然單EV方法[用多熒光、單粒子干涉反射熒光成像、納米粒子跟蹤分析、微流體電阻脈沖傳感和納米流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行單EV分析(sEVA)]正在積極開發(fā)中，但它們測(cè)量不同的參數(shù)(通常是大小而不是比分子生物標(biāo)志物）。不管具體的物理測(cè)量如何，下一個(gè)問題是要分析哪種分子生物標(biāo)志物。雖然研究仍在進(jìn)行中，但很明顯，許多描述的生物標(biāo)志物在更大的臨床驗(yàn)證隊(duì)列中都失敗了。因此出現(xiàn)的一個(gè)關(guān)鍵問題是，這種失敗是否是由于選擇了給定的分子生物標(biāo)志物、PDAC的極端異質(zhì)性，或者無法準(zhǔn)確檢測(cè)正常EV群體中極少量的生物標(biāo)志物陽性EV。

作者認(rèn)為，解決當(dāng)前問題的一種方法是進(jìn)行sEVA，因?yàn)榕糠椒赡軣o法在宿主EV的背景下識(shí)別少量起源于腫瘤的EV（例如在微觀癌癥中發(fā)現(xiàn)的那些）。進(jìn)一步假設(shè)突變的癌蛋白（例如，KRASmut）或腫瘤抑制基因（例如，P53mut）可以在單個(gè)EV中檢測(cè)到，而癌細(xì)胞中發(fā)生的相同突變是腫瘤EV脫落增加的原因。檢測(cè)這些突變蛋白質(zhì)的選擇也受到它們?cè)赑DAC發(fā)展級(jí)聯(lián)中的早期出現(xiàn)的驅(qū)動(dòng)。最后，作者推斷可以通過對(duì)幾種生物標(biāo)志物進(jìn)行多重測(cè)量來提高檢測(cè)效率。在這些范例的基礎(chǔ)上，開發(fā)并驗(yàn)證了一種強(qiáng)大的sEVA技術(shù)，該技術(shù)允許在單個(gè)EV中進(jìn)行多重蛋白質(zhì)測(cè)量。sEVA技術(shù)可解答如下問題：(i)EV中假定的癌細(xì)胞相關(guān)蛋白的固有異質(zhì)性是什么，(ii)單個(gè)EV中突變的腫瘤/腫瘤抑制蛋白的頻率是多少，以及(iii)單個(gè)EV上兩種或多種癌癥相關(guān)蛋白的表達(dá)水平是多少？通過非重疊標(biāo)記“覆蓋”更多腫瘤衍生的EV(tEV)或獲得“高度特異性”的EV鑒定（如KRASmut和P53mut）是改善臨床PDAC診斷的可靠選擇。

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多個(gè)PDAC細(xì)胞系衍生EV的sEVA分析

使用胰腺癌(PDAC)，作者分析了11個(gè)細(xì)胞系中推定的癌癥標(biāo)志物的組成。在KRASmut和/或P53mut蛋白陽性的親代PDAC細(xì)胞中，只有約40%的EV也是陽性的。

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臨床1期PDAC病例的sEVA分析結(jié)果

在一項(xiàng)涉及16名經(jīng)手術(shù)證實(shí)為1期PDAC患者的盲法研究中，可檢測(cè)到KRASmut和P53mut蛋白的水平要低得多，通常在<0.1%的囊泡中（即，患者樣本中陽性囊泡占比通常<0.1%）。16名患者中有15名可通過新的sEVA方法檢測(cè)到這些囊泡。

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使用血漿sEVA對(duì)PDAC癌癥檢測(cè)進(jìn)行建模

使用建模方法，作者估計(jì)基于單EV分析(sEVA)技術(shù)的PDAC檢測(cè)限約為0.1-cm3腫瘤體積，優(yōu)于臨床成像能力。這些發(fā)現(xiàn)確立了sEVA用于早期癌癥檢測(cè)的潛力。

參考文獻(xiàn)：

FergusonS, Yang KS, Zelga P, Liss AS, Carlson JCT, Del Castillo CF, Weissleder R. Single-EVanalysis (sEVA) of mutated proteins allows detection of stage 1 pancreaticcancer. Sci Adv. 2022 Apr 22;8(16):eabm3453. doi:10.1126/sciadv.abm3453. Epub 2022 Apr 22. PMID: 35452280.

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