什么是流式細(xì)胞術(shù)？

流式細(xì)胞儀通過將細(xì)胞或顆粒分離到狹窄、快速流動(dòng)的液體流中來檢測(cè)懸浮液中的細(xì)胞或顆粒。樣品通過激光，激光可檢測(cè)大小、顆?；蚣?xì)胞數(shù)量、粒度和熒光等特性。   熒光標(biāo)記，通常是熒光標(biāo)記的抗體，通常用于流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)，可以提供有關(guān)細(xì)胞過程的信息，例如，細(xì)胞是活的還是死的。

熒光標(biāo)記的樣本連接到流式細(xì)胞儀，并通過流體動(dòng)力學(xué)聚焦定向成被快速移動(dòng)的流體“鞘”包圍的細(xì)液體流。  一個(gè)激光（或多個(gè)激光）聚焦在該移動(dòng)液體流上，檢測(cè)器瞄準(zhǔn)檢測(cè)前向散射、側(cè)向散射和熒光分子的同一點(diǎn)。  結(jié)合來自粒子的熒光，檢測(cè)器識(shí)別散射光。

通過軟件檢測(cè)和分析熒光發(fā)射峰處的亮度波動(dòng)，該軟件提供有關(guān)粒子特性的數(shù)據(jù)。  收集樣本數(shù)據(jù)被稱為“采集”，使用的軟件可以調(diào)整參數(shù)，例如通道之間的泄漏補(bǔ)償。  此外，該軟件可確保正確設(shè)置參數(shù)。   流式細(xì)胞儀的五個(gè)主要組件是流式細(xì)胞、測(cè)量系統(tǒng)、檢測(cè)器、放大系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)軟件。

什么是蛋白質(zhì)工程？

蛋白質(zhì)工程用于合成新的蛋白質(zhì)，此外，可以修改（工程化）現(xiàn)有蛋白質(zhì)的序列和結(jié)構(gòu)以實(shí)現(xiàn)所需的功能。  蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域已顯著受益于分子力場、結(jié)構(gòu)生物信息學(xué)的進(jìn)步以及對(duì)蛋白質(zhì)復(fù)雜 3D 結(jié)構(gòu)的了解不斷增加。  由于知識(shí)和技術(shù)的進(jìn)步，計(jì)算方法已經(jīng)成為可能。

蛋白質(zhì)工程是一門相對(duì)較新的學(xué)科，在理解蛋白質(zhì)折疊和識(shí)別以告知蛋白質(zhì)設(shè)計(jì)原則方面已經(jīng)進(jìn)行了大量研究。  蛋白質(zhì)工程策略分為兩類；  定向進(jìn)化和合理的蛋白質(zhì)設(shè)計(jì)。   這兩種方法并不相互排斥，研究人員通常在蛋白質(zhì)工程中同時(shí)應(yīng)用這兩種方法。多蛋白質(zhì)工程方法包括多序列比對(duì)、協(xié)同進(jìn)化分析、多價(jià)結(jié)合和結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)。

蛋白質(zhì)工程基于重組DNA技術(shù)。   經(jīng)典的合理設(shè)計(jì)方法涉及定點(diǎn)誘變，其中將特定的氨基酸序列插入靶基因。  可以使用位點(diǎn)重疊法或全質(zhì)粒單輪 PCR 進(jìn)行定點(diǎn)誘變。   當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的序列已知時(shí)，合理設(shè)計(jì)是有用的。  然而，在許多情況下，序列是未知的，這促進(jìn)了對(duì)進(jìn)化方法的需求。

高通量篩選的最新技術(shù)進(jìn)步為該領(lǐng)域的發(fā)展提供了機(jī)會(huì)。  流式細(xì)胞術(shù)是一種可以提供相關(guān)數(shù)據(jù)的技術(shù)，有助于為蛋白質(zhì)工程研究提供信息。

流式細(xì)胞儀如何用于檢測(cè)蛋白質(zhì)工程

近年來，流式細(xì)胞儀在蛋白質(zhì)工程中的應(yīng)用出現(xiàn)了巨大的機(jī)遇。 可以對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行工程改造，使其具有特定的特性，例如配體結(jié)合、變構(gòu)、催化活性和改進(jìn)的穩(wěn)定性。  流式細(xì)胞術(shù)可以以高通量的方式檢測(cè)這些工程蛋白的生物標(biāo)志物，每分鐘對(duì)數(shù)百甚至數(shù)千個(gè)顆粒進(jìn)行分類和計(jì)數(shù)。

含有工程蛋白質(zhì)的細(xì)胞被熒光標(biāo)記并通過流式細(xì)胞儀，在那里它們被軟件檢測(cè)和分析，通常需要多輪篩選才能找到具有目標(biāo)功能特性的工程蛋白。執(zhí)行該多步驟過程，直到觀察到的蛋白質(zhì)功能改善可以忽略不計(jì)或生成的蛋白質(zhì)滿足所選標(biāo)準(zhǔn)。

有多種方法可以在工程蛋白中產(chǎn)生序列多樣性，包括隨機(jī)誘變、同源體外重組或非同源重組。 無論創(chuàng)建序列多樣性的方法如何，進(jìn)化工程技術(shù)的主要障礙是傳統(tǒng)篩選過程對(duì)蛋白質(zhì)工程過程中產(chǎn)生的大量蛋白質(zhì)序列庫的限制。

流式細(xì)胞術(shù)在蛋白質(zhì)工程方面具有巨大優(yōu)勢(shì)，因?yàn)樗軌蚩焖贆z測(cè)工程細(xì)胞中表達(dá)的序列，為研究人員提供大量數(shù)據(jù)，為選擇具有感興趣特性的蛋白質(zhì)提供信息。蛋白質(zhì)工程中采用的其他技術(shù)包括噬菌體展示、使用報(bào)告酶的生物測(cè)定和單孔測(cè)定。

總結(jié)

蛋白質(zhì)工程是一個(gè)相對(duì)較新的研究領(lǐng)域，越來越多地用于制造具有各種功能特性的定制蛋白質(zhì)，用于藥物設(shè)計(jì)等目的。  分析大型工程蛋白質(zhì)庫的需要促進(jìn)了該領(lǐng)域高通量方法的使用。   流式細(xì)胞術(shù)就是這樣一種技術(shù)，已顯示出實(shí)現(xiàn)這一要求的潛力，可在短時(shí)間內(nèi)提供研究所需的數(shù)據(jù)。

蛋白組/代謝組實(shí)驗(yàn)

? iTRAQ 定量蛋白質(zhì)組學(xué)

? Label Free 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)

? LC-MS/MS 蛋白質(zhì)譜鑒定

? DIA 全息掃描定量蛋白質(zhì)
? 廣泛靶向代謝組學(xué)

蛋白/核酸相互作用實(shí)驗(yàn)

? GST pull down

? RNA pull down

? DNA pull down

? Co-IP 免疫共沉淀

? TAP-MS串聯(lián)親和純化

分子細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

? 基因調(diào)取/合成 (cDNA克隆)

? 熒光定量PCR (qPCR)

? 載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)服務(wù)

? miRNA靶基因驗(yàn)證
? 慢病毒包裝

科研產(chǎn)品

? 哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體

? 人cDNA克隆庫

? 慢病毒表達(dá)載體

? 慢病毒干擾載體

抗體工程服務(wù)

? 單克隆抗體測(cè)序

? 抗體從頭測(cè)序

? 抗體表達(dá)服務(wù)

? 重組抗體表達(dá)

實(shí)驗(yàn)試劑盒

? RNA pull down 試劑盒

? GST pull down 試劑盒

? COIP 試劑盒

? Flag 試劑盒

輝駿實(shí)力